美國科羅拉多州立大學Robert E. Cohen研究小組:高親和力游離泛素傳感器
美國科羅拉多州立大學Robert E. Cohen研究小組取得一項新突破。該研究組描述了一種基于親和力的熒光傳感器,該傳感器能夠特異性結(jié)合游離泛素分子,解離常數(shù)Kd值小于60pM,加上新開發(fā)的工作流,使得研究者能夠在細胞裂解物中區(qū)分和量化游離的、連有蛋白質(zhì)的和巰基酯形式的泛素。
據(jù)介紹,泛素(Ub)連接是一種十分重要的翻譯后修飾,幾乎影響真核生物內(nèi)的所有蛋白質(zhì)。泛素化的功能和機制得到了廣泛地研究,然而其動力學和游離(未連接的)泛素分子調(diào)節(jié)機制還知之甚少,其中一個主要障礙是缺乏簡單可靠的技術(shù)來量化細胞內(nèi)泛素化水平,及監(jiān)控結(jié)合物中泛素分子的釋放。另外,通過傳感器染色,研究者通過顯微鏡在固定細胞內(nèi)觀測到了游離泛素。通過傳感器實時分析,能夠十分靈活且精密地測定任何(多)泛素連接物的去泛素化。
他們的最新研究提出了高親和力游離泛素傳感器,能夠準確定量泛素穩(wěn)態(tài)和去泛素化。 相關(guān)論文于2019年8月2日發(fā)表在《自然—方法學》上。