核酸自動提取儀有哪些分類?影響核酸提取的因素有哪些?
以下內(nèi)容中,小編將對核酸自動提取儀的相關(guān)內(nèi)容進行著重介紹和闡述,希望本文能幫您增進對核酸自動提取儀的了解,和小編一起來看看吧。
一、核酸自動提取儀及其分類
核酸自動提取儀又名核酸自動純化儀,是應用配套的核酸提取試劑,來自動完成樣本核酸提取工作的儀器。廣泛應用在疾病控制中心、臨床疾病診斷、輸血安全、法醫(yī)學鑒定、環(huán)境微生物檢測、食品安全檢測、畜牧業(yè)和分子生物學研究等多種領(lǐng)域。
1.根據(jù)儀器型號大小不同劃分
自動液體工作站:自動液體工作站是功能非常強大的設(shè)備,液體分液、吸液等自動完成,甚至能通過整合擴增、檢測等功能,實現(xiàn)標本提取、擴增、檢測全自動化。大型自動液體工作站因為設(shè)備成本高昂,運行成本高,適合一次提取幾千個同一種類標本,所以真正得到應用的比較少。
小型自動核酸提取儀:利用封裝好的配套試劑自動完成提取純化過程;小型自動化的儀器,因為儀器設(shè)備和運行成本低,操作方便得到越來越多的應用。
2.根據(jù)提取原理不同劃分
離心柱法的儀器:離心柱法核酸提取儀主要采用離心機和自動移液裝置相結(jié)合的方法,通量一般在1-12個樣本,操作時間和手工提取相差無幾,不能提高實際工作效率,且價格昂貴,不同型號儀器的耗材也不能通用。
磁珠法的儀器:以磁珠為載體,利用磁珠在高鹽低PH值下吸附核酸,在低鹽高PH值下與核酸分離的原理,再通過移動磁珠或轉(zhuǎn)移液體來實現(xiàn)核酸的整個提取純化過程。由于其原理的獨特性,所以可設(shè)計成很多種通量,既可以單管提取,也可以提取8-96個樣本,且其操作簡單快捷,提取96個樣本僅需30-45min,大大提高了實驗效率,且成本低廉,是目前市場上的主流儀器。
二、影響核酸提取效率的因素
一般核酸提取的主要步驟分為四步:裂解、吸附、洗滌和洗脫,每一步出現(xiàn)問題都會影響磁珠的提取效率。下面就具體介紹一下影響核酸提取效率的一些因素。
1、樣本裂解是裂解細胞或病原體,釋放里面的核酸。影響裂解的主要因素有裂解液的成分及裂解的溫度和時間。
裂解液成分:對于一些難裂解的樣本,可以通過提高胍鹽濃度以及表面活性劑濃度來增強裂解液的裂解能力。
裂解溫度和時間:提高溫度和增加裂解時間可以讓細胞裂解更徹底,得到更多核酸,需要摸索合適的溫度和時間;溫度過高或時間過長,也有可能導致核酸斷裂或醇類揮發(fā)導致的提取效率下降。
2、吸附是磁珠吸附核酸的能力,影響吸附能力的有磁珠的吸附能力以及結(jié)合緩沖液的結(jié)合能力。磁珠吸附能力受到磁珠比表面積以及修飾基團的密度影響??筛鶕?jù)實際樣本選擇磁珠粒徑和修飾基團。
自動核酸提取儀
3、洗滌是去除DNA以外的RNA、蛋白質(zhì)等雜質(zhì)。關(guān)系到核酸的純度,磁棒的振蕩幅度和混合時間會影響洗滌效率。磁棒振蕩幅度太小或混合時間太短,有雜質(zhì)殘留在磁珠上會影響磁珠吸附核酸的能力。振蕩太劇烈或時間太長,會丟失部分核酸或造成核酸的斷裂、降解,得率下降。
4、 洗脫是解離吸附在磁珠上的DNA,得到純度和濃度均很高的DNA,直接影響核酸得率,影響洗脫效率的因素有磁珠的干燥程度以及洗脫溫度和時間。磁珠未充分晾干,可能會有醇類等雜質(zhì)殘留,影響后續(xù) PCR 反應;磁珠過分干燥,核酸可能會干結(jié)在磁珠上,導致洗脫效率下降。適當提高洗脫溫度和時間,有利于核酸從磁珠上游離下來,時間過長或溫度過高,核酸有可能會降解,需要把握其中的平衡。
全自動核酸提取儀能夠?qū)崿F(xiàn)自動化、高通量操作,適用于疾病控制中心、臨床疾病診斷、輸血、出入境檢驗檢疫、食藥監(jiān)、法醫(yī)學鑒定、環(huán)境微生物檢測、食品檢測、教學、科研、畜牧業(yè)和分子生物學研究等多種領(lǐng)域,尤其是對各地區(qū)爆發(fā)疫情需大規(guī)模核酸檢測起著至關(guān)重要的作用。
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